《兽医寄生虫病学》实验教学大纲

一、实验课程简介

兽医寄生虫学实验室为动物医学专业开设的实验课程主要是配合课堂讲授内容，课堂讲授以面向21世纪教材课程教材《兽医寄生虫学》为蓝本的基础上，不断增补新的内容和新的研究进展。双语教学内容以《Veterinary Parasitology》（GM Urquhart主编，第二版，1993）和《Foundation of Parasitlology》(LS Roberts主编，第七版，2004)辅助教材。双语讲授内容力求与《兽医寄生虫学》讲授主线一致。实验内容以国内经济意义较大的虫种，部分考虑河南省及周边地区流行的虫种。通过实验教学让学生掌握一些常用的兽医临床寄生虫病诊断技术、虫种鉴别要点，同时开设综合性实验“家畜寄生虫学完全剖检法”和设计性实验“鸡球虫人工感染试验”。

二、教学目的与基本要求

通过对本课程的学习，要求学生能识别主要家畜寄生虫病原，并作出鉴定；掌握进行寄生虫病调查的方法；学生能应用所学知识和技能独立从事寄生虫病的诊断和防治。

三、实验内容与学时分配

注：本大纲适合于动物医学专业，动植物检疫、检验专业，食品安全专业；其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12适合于动物医学专业；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12适合于动植物检疫检验专业和食品安全专业。

四、实验方式与基本要求

每次实验时，由指导教师先讲解各种虫卵及寄生虫的形态特征，对于较为复杂的实验，由老师先做示范，再由学生具体操作；学生实验时，不懂之处，可随时询问。要求每个学生都能参与实验操作，对于观察性内容，要求每个学生都要自己观察，自己绘图，写实验报告。达到学生掌握虫体结构特征并知道主要器官名称。

五、考核方式及成绩评定

实验课成绩占总成绩的20％，由两部分组成，一是每次上实验课作业成绩，二是课程结束后20个浸渍标本或玻片标本的识别，学生现场识别，根据识别结果打分。

六、实验内容安排

实验一、蠕虫学粪便检查法

一、实验学时：2学时

二、实验目的：

掌握用于虫卵检查的粪便材料的采集、保存方法及要领；掌握粪便中虫卵或球虫卵囊检查、计数及幼虫分离法的操作技术；学会在显微镜下识别寄生虫虫卵、球虫卵囊的基本方法。

三、实验内容：

指导教师讲解粪便采集、保存的方法及要领；各种检查方法的原理、适用范围、操作方法和要点及注意事项；镜下识别虫卵的方法及注意事项；用显微图像分析处理系统演示粪中的虫卵、球虫卵囊、幼虫。然后由学生自己操作、练习。

1、每人操作1份饱和盐水漂浮法─静置滤液30分钟─取表膜液制片镜检；

2、每人操作1份直接涂片法；

3、每2人操作1份离心沉淀法；

4、每小组操作1份幼虫分离法─ 静置1小时─取底部液制片镜检；

5、每2人操作1份虫卵计数法。

四、实验要求：掌握饱和盐水漂浮法、直接涂片法、离心沉淀法，了解幼虫分离法和虫卵计数法的基本要领

五、材料与工具：

挂图：待检动物体内的寄生虫卵图，畜禽粪便内常见物体图。

实验用品：漏斗架2个/组；漏筛6个/组；小烧杯（50mL）12个/组；500mL烧杯2个/组；100mL烧杯1个/组；青霉素瓶6个/组；离心管6个/组；滴管1个/人；饱和盐水1瓶/组；甘油水1瓶/组；100mL量筒1个/组；小方瓷盘1个/组；擦镜纸1平皿/组；小棉块1份/组；载玻片、盖玻片1份/组；离心机、小天平各1台；镊子2个/组；显微镜1台/人；止水夹1个/组；试管架1个/组；动物粪便1份/班；50mL烧杯两个用于配平。粪中虫卵、卵囊、幼虫示范片。

实验二、寄生性原虫形态学观察Ⅰ

一、实验学时：2学时

二、实验目的：掌握锥虫、巴贝斯虫、泰勒虫和住白细胞虫形态结构特征，认识和了解其致病性和传播媒介。

三、实验内容：

1．高倍镜或油镜下观察伊氏锥虫血片，注意虫体与红细胞的关系，虫体的形态、大小，动基体的大小及位置、波动膜与鞭毛的发育程度等。

2．油镜下观察牛环形泰勒虫及其石榴体、牛双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、马驽巴贝斯虫、牛边虫（无浆体）和鸡住白细胞虫血片，注意虫体所寄生的细胞及虫体和宿主细胞的形态、大小、位置、排列方式、数量、虫体染色质团数等，并注意彼此间的区别。

3．肉眼观察牛双芽巴贝斯虫病肝和牛环形泰勒虫病四胃、小肠、心、肝、脾、肾、淋巴结、大网膜、食道，以及传病蜱——尾突方头蜱、残缘璃眼蜱。

四、实验要求：掌握伊氏锥虫，牛、马巴贝斯虫，环形泰勒虫，边虫的形态特点和鉴别要领

五、材料与工具

实验用挂图：各种原虫形态图，牛双芽巴贝斯虫与其他巴贝斯虫形态区别表，双芽巴贝斯虫在红细胞内的繁殖方式图。

实验用品：香柏油、二甲苯、显微镜、放大镜、擦镜纸等。

实验三、寄生性原虫形态学观察Ⅱ

一、实验学时：2学时

二、实验目的：掌握球虫、弓形虫、住肉孢子虫和纤毛虫的形态结构特征，认识和了解致病性。

三、实验内容： 

1．肉眼观察鸡盲肠球虫病盲肠、火鸡组织滴虫病盲肠和肝脏、兔球虫病肝、水牛住肉孢子虫病食道和腿部肌肉等；

2．高倍镜下观察猪结肠小袋纤毛虫滋养体、住肉孢子虫病肌肉压片和切片（包囊、梅休尔氏囊）；

3．油镜下观察弓形虫滋养体、假囊及速殖子，水牛住肉孢子虫滋养体、鸡盲肠球虫病盲肠切片中的裂殖体、配子体及裂殖体和裂殖子涂片。

4．涂片观察鸡、兔球虫孢子化和未孢子化卵囊。

四、实验要求：掌握球虫、弓形虫、住肉孢子虫和结肠小袋纤毛虫的鉴别要点和结构特征

五、材料与工具

挂图：鸡、兔球虫卵囊及发育史图，弓形虫形态及发育史图，纤毛虫形态及发育史图。

实验用品：香柏油、二甲苯、显微镜、小瓷盘、放大镜、擦镜纸、脱脂棉、载玻片、盖玻片、50％甘油水、小块纱布等。

实验四、弓形虫病血清学诊断技术

一、实验学时：4～6学时

二、实验目的：掌握弓形虫病血清学诊断技术，通过对弓形虫的检测和鉴定，为治疗和预防弓形虫病提供科学依据

三、实验内容：

弓形虫抗原的制备：取小鼠，以碘酒和70％酒精消毒小鼠腹部皮肤，腹腔接种弓形虫速殖子，4d后乙醚麻醉或颈椎脱臼处死小鼠，以碘酒和70％酒精消毒腹部皮肤，向腹腔内注入无菌生理盐水3～4毫升，轻揉腹壁，再抽取腹腔液，2500r/min离心15min，顷去上清夜，在沉淀中加10倍pH值7.2PBS，振荡混匀，4℃过夜，10000r/min 4℃离心1h，取上清液加等量1.7％生理盐水。﹣20℃以下保存备用。

绵羊红细胞的鞣化：采集全血2～3mL,快速注入含有0.2～0.3mL 5%柠檬酸钠的试管内，轻轻摇匀。2000r/min离心10min，加入0.15mol/pH值7.2PBS适量进行洗涤，2000r/min离心10min，再洗涤。如此反复洗涤3次，用PBS配成2.5％的红细胞悬液。加入含1％鞣酸的PBS使鞣酸的终浓度为1/10000或1/20000，370℃水浴15min，用PBS洗涤3次，再加PBS配成2.5％鞣化红细胞。

抗原致敏鞣化的绵羊红细胞：将2.5％鞣化红细胞1份，抗原液1份，pH值6.4的PBS液4份混合，摇匀后室温下放置15min，加入1％正常兔血清后，2000r/min离心洗涤2次，再用PBS配成2.5％的红细胞悬液。4℃过夜。

待检血清的采集与处理：取待检血清0.5mL置于试管中，加入1％正常兔血清1.5mL,56℃灭活30min，加入未致敏的绵羊红细胞2mL，4℃过夜。

间接红细胞凝集试验的操作步骤：取处理后的待检血清作倍比稀释，于96孔“V”型反应板中每孔加入上述倍比稀释的待检血清50微升，然后加入致敏的绵羊红细胞悬液50微升，37℃作用2h以上，观察结果。以1∶64的稀释度出现50％凝集者判为阳性，同时设立阳性对照和阴性对照。

四、实验要求：

掌握检测弓形虫血清抗体滴度的间接血凝技术，了解抗原制备和红细胞制备的过程。

五、实验材料和工具：

弓形虫虫株，小白鼠，恒温箱，离心机，血清，G3砂蕊漏斗，纤维素滤膜，试管，载玻片，盖玻片，显微镜，微量血凝试验V型反应板，微量加样器，冰箱，等

药品：生理盐水，胰酶，PBS，弓形虫诊断试剂（IHA抗原），碘酒，70％酒精，无菌生理盐水，5％柠檬酸钠，等

实验五、畜禽主要吸虫病病原形态学观察

一、实验学时：2学时

二、实验目的：

通过用肉眼、放大镜、显微镜观察，掌握吸虫的形态结构特征及重要吸虫病病原体鉴别要点和致病特点；认识和了解中间宿主，为正确诊断吸虫病奠定基础。

三、实验内容：

1、用肉眼或放大镜观察  肝片吸虫、姜片吸虫、阔盘吸虫、矛形双腔吸虫、华枝睾吸虫、前殖吸虫、日本分体吸虫和前后盘吸虫浸渍标本；肝片吸虫、前后盘吸虫、华枝睾吸虫、前殖吸虫患病器官；肝片吸虫、姜片吸虫、华枝睾吸虫、前殖吸虫中间宿主。

2、显微镜下观察

（1）玻片标本：肝片吸虫、姜片吸虫、阔盘吸虫、华枝睾吸虫、前后盘吸虫；

（2）制片观察华枝睾吸虫虫卵、肝片形吸虫虫卵、前后盘吸虫虫卵。

四、实验要求

掌握肝片吸虫、前后盘吸虫、华枝睾吸虫、前殖吸虫患病器官；肝片吸虫、姜片吸虫、华枝睾吸虫、前殖吸虫的结构特征和鉴别要领

五、材料与工具

实验用挂图：肝片吸虫、肝片吸虫消化器官、姜片吸虫、阔盘吸虫、矛形双腔吸虫、华枝睾吸虫、日本分体吸虫、鹿前后盘吸虫；

实验用品：50％甘油水6瓶，瓷盘6个，平皿6套，载玻片、盖玻片、擦镜纸、脱脂棉各适量，放大镜、显微镜及示范用显微镜。

实验六、绦虫蚴及其成虫的形态学观察

一、实验学时：2学时

二、实验目的：

通过用肉眼、放大镜、显微镜观察，掌握各种绦虫蚴及其成虫的形态结构特征和鉴别要点；认识和了解其致病特点，为正确诊断绦虫病奠定基础。

三、实验内容： 

（一）肉眼观察：

1．猪囊尾蚴及有钩绦虫浸渍标本、患病器官；

2．细颈囊尾蚴及泡状带绦虫、患病器官；

3．豆状囊尾蚴及患病器官；

4．链尾蚴及带状泡尾绦虫；

5．多头蚴及多头绦虫、患病器官；

6．棘球蚴及其寄生的肺脏和细粒棘球绦虫；

7．裂头蚴及裂头绦虫；

（二）显微镜下观察玻片标本：猪囊尾蚴，有钩绦虫成节、孕节，棘球蚴砂，泡状带绦虫孕节；制片观察带科绦虫卵。

四、实验要求

掌握猪囊尾蚴、细颈囊尾蚴、棘球蚴、脑多头蚴、链尾蚴、豆状囊尾蚴、裂头蚴等及其成虫的形态和结构特征及其鉴别要领。

五、材料与工具

挂图：各种绦虫蚴图，有钩绦虫与无钩绦虫头节、成节、孕节图，猪囊尾蚴图，细颈囊尾蚴图，裂头绦虫图。

实验用品：50％甘油水6瓶，瓷盘6个，平皿6套，载玻片、盖玻片、擦镜纸、脱脂棉各适量，放大镜、显微镜及示范用显微镜。

实验七、畜禽绦虫病病原形态学观察

一、实验学时：2学时

二、实验目的：

通过用肉眼、放大镜、显微镜观察，掌握畜禽常见绦虫的形态结构特征和鉴别要点；认识和了解其中间宿主。

三、实验内容：

1．莫尼茨绦虫浸渍标本、虫卵；扩展莫尼茨绦虫成节、孕节玻片标本；贝氏莫尼茨绦虫成节玻片标本；曲子宫绦虫成节玻片标本；中间宿主土壤螨；

2．鸡三种赖利绦虫头节模拟标本、浸渍标本及病肠；中间宿主；棘盘赖利绦虫成节、四角赖利绦虫成节和孕节玻片标本；

3．马大裸头绦虫浸渍标本；

4．犬复孔绦虫浸渍标本。

四、实验要求：

掌握莫尼茨绦虫、曲子宫绦虫、无卵黄腺绦虫、马裸头绦虫、克

氏伪裸头绦虫、赖利绦虫、节片戴文绦虫等及患病器官、中间宿主的形态和结构特征和鉴别要领

五、实验材料和工具：

实验挂图：莫氏绦虫、曲子宫绦虫、无卵黄腺绦虫成节、孕节及虫卵图，赖利绦虫头节图。

实验用品：50％甘油水6瓶，瓷盘6个，平皿6套，载玻片、盖玻片、擦镜纸、脱脂棉各适量，放大镜、显微镜及示范用显微镜。

实验八、线虫病病原形态学观察Ⅰ

一、实验学时： 2学时

二、实验目的：

掌握蛔目、杆形目、圆形目线虫及其虫卵的形态结构特征，了解上述线虫的致病性。

三、实验内容：

1．用肉眼或放大镜观察浸渍标本和患病器官：

蛔目：猪、人、犬、马、牛、狮、虎、大熊猫、鸡、鸽蛔虫，马蛲虫，鸡异刺线虫，兔栓尾线虫；猪蛔虫病病胃、肠、肝、肺；鸡异刺线虫病病肠；鸡蛔虫病病胃、肠。

杆形目和圆形目：捻转血矛线虫及病胃；3种马圆线虫及病肝、肠系膜动脉根部动脉瘤；牛、羊、猪结节虫及病肠；犬、羊、牛钩虫及病肠；猪、牛、羊肺线虫及病肺；猪肾虫；毛线虫。

2．显微镜下观察玻片标本：♀、♂蛔虫横切片，捻转血矛线虫♀、♂，猪肺线虫♀、♂，马蛲虫卵。

3．虫卵：制片观察猪蛔虫卵，捻转胃虫卵，羊肺线虫卵。

四、实验要求:

掌握各种家畜蛔虫、异刺线虫，尖尾线虫，猪、牛、羊肺线虫，捻转血予线虫，牛、羊、猪食道口线虫，牛、羊钩虫，马圆线虫，冠尾线虫的结构特征和鉴别要领。

五、实验材料与工具

实验用挂图：线虫生殖器官图，猪蛔虫头、尾、虫卵、生殖腺横切图，马蛲虫及虫卵图，捻转胃虫头、尾图，长刺后圆线虫头、尾图。

实验用品：50％甘油水6瓶，瓷盘6个，平皿6套，载玻片、盖玻片、擦镜纸、脱脂棉各适量，放大镜、显微镜及示范用显微镜。

实验九、毛首目、旋尾目、丝虫目和棘头虫形态学观察

一、实验学时：2学时

二、实验目的：

掌握旋尾目、丝虫目、毛首目及棘头虫纲虫体及虫卵形态结构特征，认识和了解其中间宿主及致病性。

三、实验内容

1．用肉眼或放大镜观察浸渍标本和患病器官及中间宿主：

（1）猪、羊鞭虫及猪鞭虫病大肠、盲肠；

（2）马大口胃虫及病胃；

（3）猪螺咽胃虫、有齿斜环咽胃虫及病胃，刚刺颚口线虫，六翼泡首线虫；

（4）鸡斧钩华首线虫、旋形华首线虫及病胃，美洲四棱线虫；

（5）罗氏吸吮线虫，结膜吸吮线虫；

（6）马、驴、牛丝状线虫，马浑睛虫，牛副丝虫；圈形盘尾丝虫；猪心脏浆膜丝虫及心脏；

（7）猪棘头虫♀、♂成虫、病肠、童虫及棘头体；中间宿主-金龟子成虫和幼虫。

2．显微镜下观察玻片标本：肌旋毛虫肌肉压片、切片，肠旋毛虫涂片、切片；猪、羊鞭虫♀、♂，罗氏吸吮线虫♀、♂，棘头体。

3．制片观察鞭虫卵、猪胃虫卵、猪棘头虫卵。

四、实验要求：

掌握旋尾目、丝虫目、毛首目及棘头虫纲虫体及虫卵形态结构特征和鉴别要领。

五、实验材料与工具

实验用挂图：猪、羊鞭虫图，似蛔线虫、泡首线虫图，华首线虫图，吸吮线虫图，猪棘头虫及其虫卵图。

实验用品：50％甘油水6瓶，瓷盘6个，平皿6套，载玻片、盖玻片、擦镜纸、脱脂棉各适量，放大镜、显微镜及示范用显微镜。

实验十、蜱螨昆虫的形态学观察

一、实验学时： 2学时

二、实验目的：

认识蜱螨昆虫的一般形态结构特征和致病作用；掌握硬蜱和螨病病原的形态结构特征及鉴别要点。

三、实验内容：

1．肉眼或放大镜观察浸渍标本：璃眼蜱，革蜱（短头蜱），血蜱（二棘盲蜱），牛蜱（尾突方头蜱）；鸡皮刺螨，鸡奇棒恙螨，山羊痒螨及疥螨；牛皮蝇蚴，羊鼻蝇1-3期幼虫、蛹及成虫，肠胃蝇幼虫及成虫，兽胃蝇蚴，赤尾胃蝇幼虫及成虫；绵羊虱蝇，厩螫蝇；家蝇、伏蝇、夏厕蝇；蚊、蠓、虻；牛血虱，猪血虱，山羊、牛毛虱，鸡羽虱浸渍标本及干插标本。

2．肉眼观察患病器官：兔疥螨病皮肤及病脚，鸡突变膝螨病脚（石灰脚）；肠胃蝇及赤尾胃蝇L3、兽胃蝇L3寄生的病胃

3．显微镜下观察玻片标本：兔疥螨，兔痒螨，鸡刺皮螨，璃眼蜱成虫（♂），牛皮蝇后气孔，兽胃蝇后气孔及口器，猪血虱，鸡羽虱。

四、实验要求：

掌握常见硬蜱、软蜱、疥螨、痒螨、蠕形螨、刺皮螨、牛、羊、

马蝇蛆，虱、蚊、蝇等的形态和结构特征及其鉴别要领。

五、实验材料与工具

实验用挂图：硬蜱外部形态构造图，硬蜱科几个属的比较图，疥螨图，痒螨图。

实验用品：50％甘油水6瓶，瓷盘6个，平皿6套，载玻片、盖玻片、擦镜纸、脱脂棉各适量，放大镜、显微镜及示范用显微镜。

实验十一、鸡柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）病的

人工感染及其诊断和防治

一、实验学时：4～6学时

二、实验目的：

学习和掌握鸡盲肠球虫病的临床诊断和实验室诊断方法及防治技术，培养学生的综合素质和能力。

三、实验内容：

实验设计：在教师指导下，学习小组从鸡的购进、饲养管理、球虫计数和人工感染、临床症状观察、内生发育虫体检查、治疗和疗效考核、子代虫体的培养等进行系统地学习和研究。

实验方法步骤：

1、购进1日龄公雏，置无球虫环境中喂养；

2、至鸡8～10日龄时分组，每组10只鸡，试验组人工感染球虫分每只鸡感染20000、50000、100000个孢子化卵囊，同时设不感染不用药对照组和感染不用药对照组；药物预防试验于感染前2天给药；药物治疗试验分别于感染当天、第二天、第四天给药；

3、孢子化球虫卵囊计数及人工感染；

4、逐日记录饮食情况，观察临床症状，并进行粪便记分；对死亡鸡随时剖检，观察病变并进行病变记分，同时刮取盲肠黏膜制片检查内生发育阶段虫体；

5、感染后第八天，剖杀全部试验鸡，检查盲肠病变并进行病变记分；取盲肠内容物匀浆，计数盲肠卵囊产量；刮取盲肠黏膜制片镜检虫体；

6、计算抗球虫指数，考核药物疗效；

7、分组收集卵囊进行培养，定时观察孢子化情况，至80％卵囊完成孢子化，收集保存卵囊。

四、实验要求：

掌握球虫的人工接种方法、实验观察方法、发病规律和发病过程，学会内生发育阶段虫体检查技术和内生发育规律，以及药物防治方法。

五、实验材料和工具

1、实验动物：小公鸡。

2、实验用卵囊：实验室保存的柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊。

3、实验用品：载玻片、盖玻片、擦镜纸、50％甘油水、滴管、吸管、香柏油、二甲苯、小纱布、剪刀、眼科剪子、眼科镊子、50mL烧杯，10mL量桶、50mL量桶、平皿，饱和盐水，2.5％重铬酸钾、离心机、显微镜、污物桶等。恒温培养箱。抗球虫药。

实验十二、寄生虫病学剖检技术及玻片标本制作

一、实验学时：4～6学时

二、实验目的：

掌握畜禽寄生虫学完全剖检法和寄生虫材料的采集、固定、保存、记录、封装技术，并能用肉眼、放大镜及显微镜鉴别所查到的虫体及虫卵。

三、实验内容：每班分六组，每组剖检一只鸡（或患寄生虫病的兔、羊、猪）。

1．称重：检查外部情况并记录之，收集发现的外寄生虫；

2．宰杀、脱毛、检查体表；

3．摘出内脏：检查胸腹腔及气囊；

4．各器官的检查：

（1）食道和气管：剪开，检查及刮取粘膜压片查虫；

（2）嗉囊、胃、肠、胆囊：分别、分段淘洗内容物，查虫；刮取粘膜压片查虫；

（3）肝、肺、胰：分别撕碎、置40℃温生理盐水中反复挤压，捞出大块组织，反复沉淀，查沉淀物中虫体；

（4）生殖器官、腔上囊、泄殖腔：剪开检查，并刮取粘膜压片查虫；

（5）眼：用镊子掀开眼睑检查；取出眼球，用水冲洗后检查沉淀物。

5．登记

三、寄生虫材料的采集、固定、保存、记录和封装

吸虫：毛笔或解剖针挑虫→生理盐水洗虫 → 含5%甘油的70%酒精固定 →装瓶→登记、加标签→孟节列耶夫膏封口保存；

绦虫：连同寄生肠段置清水中5～6小时 →采集虫体 → 劳氏液或巴氏液中固定 →装瓶→登记、加标签→孟节列耶夫膏封口保存；

线虫：毛笔或解剖针挑虫 →生理盐水中洗净 → 尽快移入70℃巴氏液中固定 →装瓶→登记、加标签→孟节列耶夫膏封口保存。                    

四、实验要求：

掌握畜禽寄生虫学完全剖检法，熟悉寄生虫材料的采集、固定、保存、记录、封装技术，并能鉴别所查到的虫体及虫卵。

五、实验材料和工具：

实验用挂图：所剖检动物各器官系统寄生虫汇总表及各主要寄生虫挂图。

实验用品：

1、器械：动物解剖器一套（解剖刀、剥皮刀、手术刀、剪子、镊子），眼科剪子、眼科镊子、解剖针、毛笔、大瓷盘、小瓷盘、瓷盆、桶、粪筛、漏斗、漏斗架、放大镜、实体显微镜、平皿、酒精灯、滴管、试管、小玻瓶、玻璃笔、铅笔、标本瓶、载玻片、盖玻片、棉线、标签纸、肥皂、毛巾、电炉、污物桶等。

2、药品：生理盐水、劳氏液、巴氏液、含5%甘油的70%酒精、5％～10％福尔马林、孟节列耶夫膏。

3、实验动物：患寄生虫病的鸡（或兔、羊、猪）。